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怎样利用 BLI 技术分析 Strep 标签蛋白?
人阅读 发布时间:2022-03-22 08:36
生物膜干涉技术(Bio-Layer Interferometry, BLI), 是一种无标记(Label-free)光学生物传感技术,用于实时监测分析生物分子相互作用(例如抗原-抗体相互作用),并对其结合强度和动力学进行量化分析。与 SPR 技术不同的是, BLI 技术中不使用金属芯片,而是利用生物传感器。将配体偶联在传感器的末端,浸入样品中来捕获分析物。
如何测量分析物与配体是否结合?
当光束射出后,对来自生物传感器末端表面的反射光进行测量,如果配体与分析物相互作用,则末端表面的膜层比仅有配体(未结合分析物)的膜层更厚,反射光波长也不同,两种反射光谱之间的波长形成一束干涉光谱。BLI 仪器(Octet® 或 BLItz®)通过测量来自配体,或配体-分析物的复合物的干涉光谱位移值,实现结合强度和动力学的实时监测。
理论上,配体虽然可以直接通过化学偶联方法固定到感受器表面,例如 EDC/s-NHS 偶联,却还需要花费更多时间寻找最佳反应条件,还可能降低配体活性。另一方面,配体的方向也有可能发生变化,分析物的可及性降低,导致生物传感器的多次测量结果不一致。
Strep-tag® 技术则通过间接偶联的方式,避免了以上缺陷。首先将 Strep-Tactin®XT 固定在生物传感器上,捕获 Twin-Strep-tag® 标记的蛋白质(配体)。由于标签的位置已经确定,所有通过 Twin-Strep-tag® 标记的配体,都以特定的方向固定在传感器表面,保证了方向的统一性。此外,Strep-Tactin®XT 对 Twin-Strep-tag® 有高达 pM级别的 亲和力,可以从复杂样品(例如培养物上清液)中特异性捕获 Twin-Strep 标记的融合蛋白,从而获得可靠和可靠的数据。
配套的 Strep-Tactin®XT BLI Coupling Kit 试剂盒中提供了快速简单地固定 Strep-Tactin®XT 所需的所有试剂。
更多产品细节请点击:
https://www.biomart.cn/infosupply/104070651.htm
如何测量分析物与配体是否结合?
当光束射出后,对来自生物传感器末端表面的反射光进行测量,如果配体与分析物相互作用,则末端表面的膜层比仅有配体(未结合分析物)的膜层更厚,反射光波长也不同,两种反射光谱之间的波长形成一束干涉光谱。BLI 仪器(Octet® 或 BLItz®)通过测量来自配体,或配体-分析物的复合物的干涉光谱位移值,实现结合强度和动力学的实时监测。
理论上,配体虽然可以直接通过化学偶联方法固定到感受器表面,例如 EDC/s-NHS 偶联,却还需要花费更多时间寻找最佳反应条件,还可能降低配体活性。另一方面,配体的方向也有可能发生变化,分析物的可及性降低,导致生物传感器的多次测量结果不一致。
Strep-tag® 技术则通过间接偶联的方式,避免了以上缺陷。首先将 Strep-Tactin®XT 固定在生物传感器上,捕获 Twin-Strep-tag® 标记的蛋白质(配体)。由于标签的位置已经确定,所有通过 Twin-Strep-tag® 标记的配体,都以特定的方向固定在传感器表面,保证了方向的统一性。此外,Strep-Tactin®XT 对 Twin-Strep-tag® 有高达 pM级别的 亲和力,可以从复杂样品(例如培养物上清液)中特异性捕获 Twin-Strep 标记的融合蛋白,从而获得可靠和可靠的数据。
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