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如何成为一个「T细胞活化实验」的「小天才」？

人阅读发布时间：2022-08-24 16:48

激活 T 细胞的方法

众所周知，T 细胞的体外刺激是分为抗原特异性的T细胞刺激，和抗原非特异性的 T 细胞刺激。

说到初始 T 细胞的激活，扩增和分化，相信大家都熟悉这两个需要的刺激信号。

第一个信号是由 T 细胞抗原识别受体 (TCR) 与和其相应的 MHC 配体结合后产生。因为单独连接 TCR 不会诱导 T 细胞完全活化，会导致无反应的状态，因此除了 TCR 之外，共刺激受体（如 CD28）还必须传递第二个信号，也就是支持信号。CD28 介导的共刺激与 TCR 信号协同作用，从而促进激活，扩增和分化。

除此之外，像 IL-2（第三信号）等细胞因子，也参与了T细胞刺激的和后期阶段。值得注意的是，激活强度还可以通过各种培养因素来调节，比如培养基的组成，细胞因子环境，培养方法和供体细胞。

让活化过程「精确可控」

在免疫基础研究中，通常我们所用来激活T细胞的方式是使用结合单克隆抗 CD3 和抗 CD28 的磁珠。然而为了满足一些实验需求，常常需要使用更加灵活的刺激 T 细胞的方法，对激活信号持续时间进行控制，来精确的控制信号的启动和中止。

为了达到这一目的，IBA Lifesciences 研发了一种新型T细胞扩增方法 Streptamer^®，以独特的灵活性脱颖而出，让活化过程「精确可控」。

他们使用了低亲和力的抗 CD3 和抗 CD28 的抗体 Fab 片段（非传统全长抗体），结合上 Twin-Strep-tag 亲和标签，形成 CD3 Fab-Strep 和 CD28 Fab-Strep。再结合非磁的可溶性蛋白聚体 Strep-Tactin^®，在亲和力作用下，即可与 TCR 和 CD28 共刺激受体多价结合，来传递激活信号了。

这种方法的优点，除了用于刺激的试剂是非磁性的可溶蛋白复合物外，还有通过简单的加入 biotin，即可以移除刺激试剂，达到精确掌控活化时间的目的。

当然，也可以根据实验需求，调整 CD3:CD28 Fab-Strep 的比例；或是使用预混好的 CD3:CD28 Premix，操作更方便。

（实验流程）

原理介绍了这么多，让我们看一下 Streptamer^® 的实际使用数据吧：

使用 CD3/CD28 Streptamer^® premix 试剂扩增 T 细胞

（使用 CD3/CD28 Streptamer^® 扩增经 CD3 Fab Streptamer^® Isolation Kit MB (6-8000-201) 分离得到的 CD3+ 人 T 细胞，13 天后，测量细胞的扩增倍数。）

显微镜下观察培养中的 T 细胞，发现经 Streptamer^® 细胞扩增试剂活化后，第三天即形成细胞群

（使用 (左)，未使用 (右) CD3/CD28 Streptamer^® 扩增经 CD3 Fab Streptamer^® Isolation Kit MB (6- 8000-201) 分离得到的 CD3+ 人 T 细胞。）

T 细胞在经 Streptamer^® 试剂诱导活化后，检测细胞表面活化标记 CD25 和 CD69

（使用 CD3/CD28 Streptamer®扩增经CD3 Fab Streptamer® Isolation Kit MB (6-8000-201) 分离得到的 CD3+ 人 T 细胞 6 天。使用流式细胞仪检测 CD3+ T 细胞的活化标记 CD25 和 CD69。死细胞已使用 DAPI 染色排除。）

使用 CD3/CD28 Streptamer^® 试剂后，T 细胞的活化增殖情况

（使用 CD3/CD28 Streptamer^® 扩增经 CD3 Fab Streptamer^® Isolation Kit MB (6-8000-201) 分离得到的 CD3+人 T 细胞，使用 CFSE 染色并在 48 孔培养板中培养 5 天。在含 CD4+T 细胞 (上图)或 CD8+ T 细胞(下图)中，用流式细胞仪测量细胞的增殖。死细胞已使用 PI 染色排除。）

Streptamer^®的优点总结